宿主细胞残留DNA提取及检测

当前，各类生物制品已被广泛应用于预防和治疗疾病，尤其是新冠疫情爆发以来，在治疗药物筛选和疫苗研发等方面更是加大攻关力度。生物制品中的疫苗、抗体药、重组蛋白等产品是在连续传代的菌种株/细胞株上进行表达和生产，虽然经过严格的纯化工艺，但产品中仍有可能存在宿主细胞残留的DNA片段，而这些残留DNA不仅会降低生物制品的有效性，还存在传染性和致瘤性的危险。因此从生物制品有效性需求和安全角度考虑，宿主细胞残留DNA是各项质控标准的重中之重。

各国药品监管机构对宿主细胞残留DNA的含量均有着严格的限度控制，也提供了多种经典的检测方法。建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法对于监测生物制品的安全性和质量可控性至关重要。

宿主细胞残留DNA的限定标准

宿主细胞残留DNA定量检测方法

其中，qPCR法因其具有高灵敏度、特异性、准确性和耐用性等特点，现已成为生物制品工艺研究和产品质量控制的首选检测方法。

为解决宿主残留DNA引起的生物制品安全性问题，全式金自主研发了2款宿主细胞残留DNA提取试剂盒以及3款宿主细胞(Vero、CHO、E.coli)残留DNA的qPCR法检测试剂盒，可快速高效提取并检测生物制品中宿主DNA的残留量。

宿主细胞残留DNA提取

1. MagicPure^® Host Cell Residual DNA Kit (EH201)

2. MagicPure^® 32 Host Cell Residual DNA Kit (EH201-32)

产品特点

★ 适用于从≤200 μl生物制品样本中提取宿主细胞(CHO、Vero、NSO、MDCK等)的微量DNA片段；

★ 残留DNA回收率高；

★ 操作简单，无需离心，提取速度快；

★ 提取量高，纯度高；

★ 可搭配高通量磁棒式核酸提取仪，其中EH201-32配套32通道自动化核酸提取仪使用。

实验数据

分别以100-0.001 pg/μl（10倍梯度稀释）浓度的Vero碎片化DNA样品为模板，使用TransGen和Company S产品进行宿主细胞残留DNA提取回收并测试。结果表明，TransGen产品具有更高的DNA回收率。

3. TS-32 自动核酸提取仪 (TS-32) 

★ 触屏操控，自由编程；

★ 自控系统，安全智能；

★ 精确控制，高效控温；

★ 紫外消毒，杜绝污染；

★ 结果稳定，高效提取；

★ 试剂开放，兼容性好。

宿主细胞残留DNA检测

1.PerfectStart^® Vero DNA Quantification Kit (DH111)

2.PerfectStart^® CHO DNA Quantification Kit (DH121)

3.PerfectStart^® E.coli DNA Quantification Kit (DH131)

产品特点

★ 3种抗体封闭，特异性高，灵敏度高，扩增效率高，线性范围广；

★ 特殊优化的qPCR反应缓冲液，可提供更高的延伸速度，灵敏度和特异性；

★ 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR产物的污染，数据准确；

★ 专属性强：不同细胞系之间无交叉反应；

★ 准确性高：DNA标准品检测值偏差＜5%；

★ 耐用性强：DNA碎片化不会对检测结果造成影响，碎片化DNA回收率高；可适配多种qPCR仪器；

★ 稳定性高：经反复冻融7次或4℃、室温以及37℃放置8天后，产品性能均无影响。

实验数据

线性范围广

以梯度稀释的宿主细胞DNA标准品为模板，使用TransGen产品进行宿主细胞残留DNA定量检测。结果表明，TransGen产品具有宽广的线性范围。

DH111-Vero线性范围为：3 fg/μl-300 pg/μl，R²=1.000，扩增效率为 102.3%，各浓度检测值 CV<15%。

DH121-CHO线性范围为：3 fg/μl-300 pg/μl，R²=1.000，扩增效率为 97.6%，各浓度检测值 CV<15%。

DH131-E.coli线性范围为：50 fg/μl-500 pg/μl，R²=0.999，扩增效率为 98.4%，各浓度检测值 CV<15%。

专属性强

使用生物制品生产中常用的工程细胞基因组DNA对Vero、CHO、E.coli检测试剂进行干扰。结果表明，干扰组与对照组重合，未见干扰。

DH111-Vero

DH121-CHO

DH131-E.coli

耐用性强

将超声处理后的碎片化DNA(Vero、CHO)按照300 pg/μl、30 pg/μl、3 pg/μl、300 fg/μl浓度梯度稀释，并进行检测。结果表明，DNA的碎片化不会对检测结果造成影响。

 DH111-Vero                                                               DH121-CHO

将超声处理后的碎片化DNA(E.coli)按照500 pg/μl、50 pg/μl、5 pg/μl、500 fg/μl、50 fg/μl浓度梯度稀释，并进行检测。结果表明，DNA的碎片化不会对检测结果造成影响。

DH131-E.coli

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