Q：培养基 pH 值异常

A：

• 二氧化碳分压设置错误：根据培养基中碳酸氢钠的浓度而增加或降低培养箱中二氧化碳分压。

• 培养箱无二氧化碳：定期观察二氧化碳压力表，及时更换二氧化碳钢瓶。

• 细胞培养瓶盖拧得过紧：将盖子旋松 1/4 圈，或换成透气盖培养瓶。

• 细菌、真菌污染 丢弃细胞和培养基。

• 培养基中的平衡盐不匹配：二氧化碳平衡环境中使用以 Earle's 平衡盐为基础的培养基，大气条件下使用以Hank's 平衡盐为基础的培养基。

• 碳酸氢盐缓冲系统缓冲能力不足：加入 HEPES 缓冲液，使其终浓度为 10-25 mM。

Q：细胞生长缓慢

A：

• 培养基或血清改变：比较不同培养基中葡萄糖、氨基酸等成分有无差异；增加细胞接种密度；更换新鲜培养基。

• 必需生长促进成分 ( 如 L- 谷氨酰胺或生长因子 ) 缺乏、耗尽或降解使用新鲜培养基或向现有培养基中添加必需成分。

• 细胞初始接种密度过低：增大细胞接种密度。

• 支原体污染：检测培养物有无支原体污染，如果被污染，则弃之，或用支原体清除试剂进行清除。

• 细胞代次过高：取用新的细胞。

• 轻度细菌或真菌污染：在添加抗生素的培养基中培养细胞，如果培养物被污染，则弃之。

试剂储存不当血清应置于-5℃至 -20℃下储存 ；培养基应置于 2-8℃下避光储存；完全培养基应置于2-8℃下避光储存，并限在2周内使用。

Q：细胞死亡

A：

• 胰酶消化过度：缩短胰酶消化时间或降低消化用胰酶的工作浓度。

• 细胞状态差：取用新的细胞。

• 支原体污染：检测培养物有无支原体污染，如果被污染，则弃之，或用支原体清除试剂进行清除。

• 培养基中无附着因子：如采用无血清培养方法，应确保其含有附着因子，或使用包被过的培养器皿。

• 培养箱中无二氧化碳：定期观察二氧化碳压力表，及时更换二氧化碳钢瓶。

• 培养箱温度有波动：监测培养箱内温度。

• 转染试剂毒性过强，细胞代次过高，质粒纯度差使用低毒性的转染试剂或在转染后及时换液；使用低代次细胞转染 ；使用高品质的质粒转染。

• 细胞解冻或冻存过程中损伤大：取用新的细胞。

• 培养基的渗透压不正确：检查完全培养基的渗透压。大多数哺乳动物细胞可耐受的渗透压为 260-350 mOsmol/kg，昆虫细胞可耐受的渗透压为 340-380 mOsmol/kg。

• 培养基中有毒代谢产物蓄积过多：更换新鲜培养基。